本发明提供一种有毒有害物急性毒性响应迅速敏感藻的确定方法，包括选择对水环境污染敏感、容易分离培养的藻类作为筛选对象；采用叶绿素a含量≥4.0mg·L-1藻类；以便携式红外测温仪为测试仪器；设计有毒有害物供试药品，配制成10g·L-1稀释液备用；经过毒性响应测试，用所有测试时间中的最大平均温差值来确定供试藻对毒物毒性的响应和对毒物种类、种数的响应；根据毒性响应测试中供试藻对毒物毒性响应的最大平均温差值、对应的响应时间以及对毒物种类、种数响应的情况等因素确定的敏感藻。可以确定对有毒有害物急性毒性具有敏感性的敏感藻，加之敏感藻的取材广泛，分离、培养、保存容易，所需成本低；同时，所选的敏感藻对有毒有害物具有针对性，因此用于藻红外测试技术，并保证该技术测试效果的稳定性。