一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法
摘要:
一种表达木酮糖激酶基因的质粒的构建方法,它涉及一种质粒载体的构建方法。它解决了目前经代谢工程改造后的酿酒酵母木糖利用率仍然很低,且发酵副产物木糖醇产生量高的问题。构建方法:先克隆KanR基因、XKS1基因、ADH1终止子片段、酿酒酵母中2.2kb rDNA片段;然后回收、纯化基因片段与pGEMT Easy载体连接;再依次构建质粒pR、质粒pRK和质粒pRKT;最后将2.2kb rDNA片段加入质粒pRKT。本发明方法所构建的载体可以将XKS1基因高拷贝整合到酿酒酵母的染色体基因组上,实现XKS1的超量稳定表达,疏通了酿酒酵母利用木糖产乙醇的木糖代谢流,提高了木糖的利用率,降低了副产物木糖醇的产量。
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