本发明公开了用于西尼罗病毒检测的蛋白质芯片及其制备方法。本发明提供的检测西尼罗病毒的蛋白质芯片，是在生物芯片片基上固定有至少一种西尼罗病毒蛋白抗原的生物芯片。本发明具有省时、高效、高通量平行检测的优点，检测结果既可肉眼定性观察，也可用扫描仪定量检测，结果可永久保存，是传统检测方法无可比拟的，是现代生物芯片技术、免疫学技术和化学技术的结晶。应用本发明的蛋白芯片一方面可以更准确的对西尼罗病毒进行临床诊断，另一方面可以直观的了解西尼罗病毒各蛋白成分在刺激机体免疫应答方面所起的作用，给亚单位疫苗研制提供理论依据，也为流行病学本底调查提供技术支持，为疾病的防治创造前提条件。