本发明提供将适宜作为具有重原子、硒、反应性官能团、萤光基、交联剂等有用官能团的非天然氨基酸的赖氨酸衍生物，特别是Nε-苄氧羰基赖氨酸(Z-Lys)衍生物位点特异性地导入希望的蛋白质中的方法。本发明还提供突变体吡咯赖氨酰-tRNA合成酶，其为序列号2所示的吡咯赖氨酰-tRNA合成酶的氨基酸序列中，选自构成吡咯赖氨酸结合位点的306位的酪氨酸、309位的亮氨酸和348位的半胱氨酸中的至少1个氨基酸残基被替换而得到的突变体酶，该氨基酸替换是：306位的酪氨酸替换为甘氨酸或丙氨酸，309位的亮氨酸替换为甘氨酸或丙氨酸，和348位的半胱氨酸替换为缬氨酸、丝氨酸或丙氨酸。