本发明公开了一种木霉孢子粉剂及其制备方法和应用。本发明木霉孢子粉剂包含木霉孢子粉和助干剂，其中，木霉孢子粉是棘孢木霉菌株T1(Trichodermaasperellum T1，保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC NO：3531)的孢子粉，其rDNA ITS区片段序列如SEQ ID NO：1所示，所述助干剂为β-环糊精、马铃薯淀粉、可溶性淀粉中的一种或几种的混合物。本发明木霉孢子粉剂可以对香蕉枯萎病起到有效防治的效果，还可以拮抗多种病原真菌，尤其对土传真菌有显著的拮抗效果。本发明制备方法节省了木霉孢子粉剂的制备时间，得到的木霉孢子粉剂密度大、萌发率高，干燥效率高，便于贮藏、运输和使用。