本发明涉及生物技术领域，公开了一种样品的核酸质量检测方法，包含在样品中加入不同长度的内对照核酸分子，在同一反应体系特异性扩增样品待测核酸的不同长度保守序列以及所述内对照核酸分子；检测扩增结果，比较保守序列数量及内对照核酸分子数量并进行分析。作为优选，本发明采用实时荧光定量PCR技术进行所述扩增与检测步骤。本发明还提供核酸质量检测试剂盒。本发明所述方法通过检测不同长度的DNA片段来确定样品中DNA降解程度的方法，且能够准确的反映出样品抑制剂的影响程度，可广泛应用于法医学检验、微生物检验以及食品安全领域。