本发明公开了一种非变性Ⅱ型胶原蛋白生产方法，步骤包括：在去除杂质时，利用1:16w/w的胃蛋白酶，分别于PH6.5和PH2.5的环境下，于26～28℃搅拌水解24小时，得到去除杂质后的软骨材料，将得到的软骨材料粉碎成粉沫；提取胶原，得到非变性Ⅱ型胶原蛋白。本发明使非变性胶原的提取由实验室规模扩展到生产规模，基本满足了生产要求；本发明技术方案简便易行、标准化强、人为因素少、节省成本、产量高；本发明中，胶原蛋白的提取过程较简便，更有利于在规模生产。