本发明公开了一种抗肝癌活性单克隆抗体及其应用。该单克隆抗体，是可以与GPC3抗原表位特异性结合的单克隆抗体；所述GPC3抗原表位的氨基酸序列为自GenBank accession Number为AAA98132.1的氨基端端第359-580位氨基酸残基。本发明制备了高效价、高特异、且具有免疫活性、并且对肿瘤细胞具有毒杀活性的鼠抗人GPC3-C单克隆抗体，为研究GPC3在组织和细胞中的表达和分布情况，深入研究GPC3蛋白的生物学功能以及肝癌的临床早期检测奠定了实验基础，并为治疗肝癌提供一种无毒性的辅助药物。