本发明公开了罗布麻叶中金丝桃苷的制备方法，该制备方法首先确定了最佳提取温度，分离材料，洗脱剂浓度，然后调节pH值后再采用针对金丝桃苷溶解萃取能力强的溶剂进行萃取，得到萃取液后，本发明再采用乙醇或甲醇在80~85℃加热回流提取，然后再在优选的冷却温度下，放置析晶，可以非常有效的将性质相近的金丝桃苷和异槲皮苷两种黄酮苷成分分离，发明还采用制备液相进一步纯化金丝桃苷，用方法学考察确定流动相，并根据金丝桃苷吸收波长，有针对性、高效率的进行分离纯化，能得到纯度达90~99%的金丝桃苷，符合一类原料药的要求。