本发明公开了一种D-天冬酰胺的制备方法，其特征在于采用以下步骤：(1)在130℃～180℃条件下，L-天冬氨酸与邻苯二甲酸酐反应，生成邻苯二甲酰-L-天冬氨酸；(2)步骤(1)获得邻苯二甲酰-L-天冬氨酸与醋酸酐及消旋试剂一起回流反应20～60分钟，生成邻苯二甲酰-DL-天冬氨酸酐；(3)将步骤(2)获得邻苯二甲酰-DL-天冬氨酸酐与氨的四氢呋喃溶液反应，得到邻苯二甲酰-DL-天冬酰胺；(4)将步骤(3)得到邻苯二甲酰-DL-天冬酰氨与水合肼反应，脱除邻苯二甲酰基得到产物DL-天冬酰胺；(5)将步骤(4)得到DL-天冬酰胺利用微生物的L-天冬酰胺酶，专一性水解其中的L-天冬酰胺，分离得D-天冬酰胺与L-天冬氨酸。