本发明涉及一种高效的烟草花粉离体液体培养的方法。该方法的操作步骤主要是在无菌条件下对经过消毒处理后的花药在B5-13液体培养的作用下通过碾压快速释放大量花粉，低速离心收集花粉，先在含有50-70mg/L浓度的秋水仙素的NLN-16液体培养基中32℃静置避光进行加倍处理，再在NLN-13液体培养基中25℃进行静置诱胚避光培养，待肉眼可见胚后置于25℃恒温摇床上振荡暗培养7-10d，达到子叶期的胚即可转入固体培养基上进行继代培养，移栽季节幼苗经炼苗后即可移栽入大田开花套袋结实。该方法具有构思新颖、设计巧妙，科学实用、高效稳定、产量大、能大大缩短烟草育种周期等特点。