本发明提供了一种新的鲫肝细胞原代培养方法。它主要包括以下步骤：a、从鲫中分离出肝组织；b、采用分步消化法对剪碎的肝组织进行消化获得细胞团；c、对获得的细胞团进行纯化和培养。本发明方法原料来自于常见水生实验动物鲫，用葡萄糖洗必泰（氯苯双胍己烷）浸泡离体组织块，对离体的组织块进行消毒，减少污染。利用分步消化法对组织进行消化，使用红细胞裂解液降低细胞中血细胞的含量，并用Percoll梯度离心，纯化肝细胞。联合取材、分步消化法、红细胞裂解液以及Percoll四种方式纯化肝细胞，本发明得到的肝细胞数量充足，且存活率达90%以上，符合原代培养的要求。