本发明涉及梳形木质素减水剂、其制备方法及应用。所述梳形木质素减水剂的制备方法包括以下步骤：(1)在水性介质中，氧化木质素至其羧基含量为1.0-3.5％，所述被氧化的木质素为禾木科植物中提取的木质素，数均分子量为2000-8500，羧基含量为0.1-0.5％；(2)使步骤(1)所得反应液、磺化剂、芳基聚醚和甲醛混合，发生磺化-缩合反应，至缩聚物的数均分子量为10000-50000，得到梳形木质素减水剂，其中步骤(1)中被氧化的木质素、步骤(2)中芳基聚醚和磺化剂的摩尔比为10∶(3-8)∶(2-10)。本发明通过引入羧基和磺酸基提供吸附基团，同时引入聚醚长链增加木质素减水剂分子的空间位阻，提高了木质素的分散性能。