本发明涉及一种精子顶体酶活性的固相滤膜检测方法，包括将精子吸附于固相滤膜表面；以离心或倾倒的方法去除固相滤膜表面除精子之外的液体和杂质；启动顶体酶活性检测反应：吸附于固相滤膜表面的精子与底物溶液接触，启动顶体酶活性检测反应；4～40℃反应30～120分钟；将底物与固相表面精子分离或者加入质控终止液；反应产物比色；通过比色得到的吸光光度值计算顶体酶活性；本发明还涉及一种精子顶体酶活性定量检测试剂盒。本发明配以专门的反应装置，操作简单、结果准确，检测手段灵活，便于批量化检测、易于推广应用。