本发明提供一种两歧双歧杆菌抗冻培养基，包括以下组分：16-20g乳糖、3-5g酵母提取物、6-9g氯化钠、0.6-1.0g山梨醇、0.2-0.5g谷氨酸，8-12g大豆蛋白胨、0.5-2.0g柠檬酸氢二铵、0.2-0.5g甜菜碱、1.0-2.5g磷酸氢二钾、0.4-0.8g抗坏血酸钠、0.1-0.2gMgSO4、0.5-1.0ml吐温80、3-5g半胱氨酸盐酸盐和1000ml蒸馏水。采用该抗冻培养基制备的两歧双歧杆菌冻干菌粉，冻干存活率在58％以上，活菌数在2.0×1011cfu/g以上，而以MRS肉汤制备的菌粉冻干存活率最高为8.74％；本发明所述两歧双歧杆菌抗冻培养基不含脱脂乳粉和海藻糖，解决了菌粉在贮存中易吸水变潮的问题。