本发明涉及涉及一株铜绿假单胞菌及其培养方法与应用。石油烃降解菌是能将石油烃作为唯一碳源进行生物降解，并产生气体、脂肪酸及生物表面活性剂等代谢产物的一类微生物的总称，可以代谢产生鼠李糖脂等生物活性物质，起到剥离原油，提高采收率的功效。本发明提供的铜绿假单胞菌在恒温通气条件下通过液体培养基培养，液体培养基配方为每100ml水中含有酵母提取物0.5g、蛋白胨0.5g、葡萄糖1.5g和氯化钠0.5g，pH6.8-8.0，可应用于低渗透性油田三次开发。本发明提供的菌种可提高采油脱油效率，菌培养方法简单易操作，生长繁殖迅速，具有扩大化生产的可行性。