本发明提供了一种检测混合物中豹骨成分的方法及所用引物，所述的方法主要包括：从待测混合物中提取总DNA；以所提取的总DNA为模板，利用特异性引物进行PCR扩增；所述特异性引物为选自：SEQ ID Nos.1和2、SEQ ID Nos.3和4、以及SEQ ID Nos.5和6中的一对、两对或三对引物；对扩增结果进行分析判断。本发明进一步提供了包含上述引物的检测混合物特别是需要鉴别是否为豹骨的药材、或者以豹骨或替代品入药的中药制剂中豹骨成分的试剂盒。本发明的引物具有较高的特异性和灵敏性。