本发明公开了一种促进花生四烯酸油脂高效积累的方法，将高山被孢霉(Mortierella alpina)菌种经活化培养后，在碳源和其它营养物质丰富的培养基上进行菌体快速增殖培养，收集菌体，再在碳源丰富而其它营养物质缺乏的培养基上进行油脂快速积累培养，收集菌体，最后在缺碳的培养基上进行花生四烯酸快速积累培养，收集菌体。本发明技术实现对花生四烯酸油脂发酵过程各个阶段的精确调控，具有操作简单，生产周期短，花生四烯酸生产强度大，油脂品质好等特点，易于在工业化中应用。