本发明公开了一种抗癌新药氟莱哌素的定量测定方法，包括对氟莱哌素的全血样品依次进行预处理和液相色谱串联质谱法检测分析，其特征在于，所述的预处理为向氟莱哌素的全血样品中加入乙醚、内标溶液和NaF饱和水溶液，再进行冷冻离心，取冷冻离心的上清液于室温下氮气吹干，用AgNO3溶液复溶后进行离心分离，取离心分离的上清液作为液相色谱串联质谱法的样品。本发明方法检测结果准确可靠，检测限低，氟莱哌素的最低测定限为0.4ng/ml，本发明方法对氟莱哌素样品的检测的专一性强，灵敏度高，操作方便，各项方法学指标均能达到中国药典的相关技术要求。