本发明属于生物技术领域，公开了艰难梭菌外毒素A检测试剂盒及组成该试剂盒的单克隆抗体。一种检测艰难梭菌外毒素A的试剂盒，包含两种抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体，分别为保藏号为CGMCC No.4979的杂交瘤细胞产生的抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体以及辣根过氧化物酶标记的由保藏号为CGMCC No.4980的杂交瘤细胞系产生的抗艰难梭菌外毒素A羧基端抗原的单克隆抗体。本发明提供的艰难梭菌外毒素检测试剂盒，通过使用两株高亲和力的配对单抗，使检测艰难梭菌的灵敏度有了显著提高。