一种能耐受高浓度丁醇的梭菌及其构建方法与应用,所述能耐受高浓度丁醇的梭菌含有htrA基因，所述htrA基因的序列为SEQ ID NO.1。所述能耐受高浓度丁醇的梭菌的构建方法，包括以下步骤：（1）pIMPI-Thl质粒的构建；（2）htrA基因过量表达重组质粒的构建；（3）htrA基因过量表达重组菌株的构建；（4）重组菌的丁醇耐受性检测。本发明还包括所述能耐受高浓度丁醇的梭菌在生产丁醇中的应用。本发明的将htrA基因在C.acetobutylicum ATCC 824中过量表达能显著提高菌株的丁醇耐受性。