本发明提供了一种药材马蓝的HPLC指纹图谱构建方法，属于中药成分检测领域，以解决马蓝药材鉴别和质量控制的问题。所述方法包括：HPLC色谱条件为：WatersC18柱：5μm，4.6×250mm，流速：0.8mL/min，乙腈A-0.05%磷酸B梯度洗脱，洗脱程序：0-10min，A：10%-30%；10-25min，A：30%-40%；25-30min，A：40%—50%；30-50min，A：50%—65%；50-80min，A：65%—85%；80-85min，A：85%—90%，检测波长254nm，柱温：25℃，进样量：20μL，在此条件下分析供试品溶液，得到了马蓝的特征指纹图谱。本发明具有操作简单、精确可靠、重复性好等优点。