本发明提供了一种脂肪酶催化异Vc混合脂肪酸酯的制备方法。该方法包括以下步骤：在Lipozyme435脂肪酶存在下，异Vc与动植物油脂在有机溶剂中发生酯交换反应；反应结束后过滤，除去脂肪酶和未反应的异Vc，滤液减压蒸馏去除有机溶剂后，再加入乙酸乙酯和水，进一步去除其中未反应的异Vc；乙酸乙酯层经无水硫酸钠干燥、减压蒸馏去除乙酸乙酯后，用柱层析法分离纯化，得到蜡状固体。异Vc的转化率最高达到48%，未反应的动植物油脂可以回收循环使用。该制备方法简单，操作方便，符合绿色环保要求。