本发明公开了一种动物专用抗生素盐酸沃尼妙林的化学合成方法，以精制截短侧耳素为原料，经对甲苯磺酰氯磺化后，与二甲基半胱胺盐酸盐反应，制得截短侧耳素二甲基半胱胺取代物；另外由D-缬氨酸、乙酰乙酸甲酯和氢氧化钾反应制得（R）-2-（1-甲氧羰基-2-烯丙基）氨基-3-甲基丁酸钾，经氯甲酸乙酯活化后与截短侧耳素二甲基半胱胺取代物反应，最后通过调节pH值，经反相萃取后，冻干得盐酸沃尼妙林。本方法优点如下：对原料截短侧耳素的精制，对有效去除产品中的杂质和简化纯化过程从源头上提供了保证；使用氯甲酸乙酯来活化D-缬氨酸的羧基，使反应更加容易进行；最后通过调节pH，经反相萃取后冻干得产品，质量稳定，纯度高。