本发明公开了一种含三氮唑的聚乙二醇蛋白质修饰剂及其制备方法和应用，化学通式为：其中，A是碳原子数为0～20的直链烷基。该修饰剂由含叠氮基的单甲氧基聚乙二醇与含末端炔键和琥珀酰亚胺的烷烃衍生物通过铜催化点击化学的方法制备。本发明涉及的含三氮唑的聚乙二醇蛋白质修饰剂可用于修饰血红蛋白，尤其是用于修饰牛血红蛋白和修饰作为人体使用的人血红蛋白。可以通过铜催化点击化学的方法高效地修饰上各种官能基团，工艺简单，成本低廉，便于工业化生产。