本发明公开了一种分泌抗人β-actin蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞，通过在大肠杆菌中原核表达人β-actin融合蛋白，以纯化的人β-actin蛋白作为抗原免疫BALB/c小鼠。经过细胞的融合及筛选获得能稳定分泌抗人β-actin蛋白McAb的杂交瘤细胞，命名为2B4。对McAb的特异性、稳定性和适用范围进行了鉴定，融合蛋白的相对分子质量为43kDa，可溶于8M尿素。杂交瘤细胞上清的抗体效价为1×105，腹水的抗体效价为1×107。Westernblot结果显示，单克隆抗体识别人、鼠、兔和鱼的β-actin蛋白，与其发生特异性反应。2B4分泌的单克隆抗体可以广泛的应用于细胞生物学和免疫学试验，具有良好的应用价值。