本发明提供一种用于检测EGFR基因突变的引物、探针、试剂盒及检测方法。本发明的方法包括：（1）提供引物和探针；（2）检测样本的处理和DNA提取；（3）荧光定量PCR反应体系的成分；（4）待检测的EGFR突变基因的靶序列；（5）利用ARMS引物区分野生型和突变型基因，反应结果通过FAM和JOE的荧光强度来判断。本发明所提供的引物、探针及检测方法可同时检测EGFR基因上的29种突变，灵敏度高，特异性强，检测速度快，整个检测过程只需要60分钟。