本发明公开了一种杂交瘤细胞株（保藏编号为CGMCC？No.6133），以及由此杂交瘤细胞株产生的单克隆抗体2B8。本发明还涉及单克隆抗体2B8在制备用于检测CD5蛋白的免疫检测工具中的应用，含单克隆抗体2B8的免疫组化试剂盒，以及单克隆抗体2B8在制备用于诊断B细胞来源肿瘤、类风湿性关节炎试剂盒中的应用。本发明所述单克隆抗体可与CD5蛋白特异性结合，而与细胞内其他蛋白无交叉反应，显著提高了CD5蛋白免疫检测的特异性和可靠性。