本发明公开了一种炔基羟丙基纤维素及其温敏性水凝胶的制备方法与应用。本发明首先提供一种天然生物基高分子羟丙基纤维素，再将这种羟丙基纤维素引入到温敏性水凝胶材料合成中，该温敏性水凝胶的方法包括以下步骤：（1）叠氮聚己内酯-2-甲基丙烯酸羟乙酯的制备；（2）聚（叠氮聚己内酯-2-甲基丙烯酸羟乙酯-共-氮异丙基丙烯酰胺）的制备；（3）炔基羟丙基纤维素的制备；（4）将聚（叠氮聚己内酯-2-甲基丙烯酸羟乙酯-共-氮异丙基丙烯酰胺）和炔基羟丙基纤维素按一定比例进行点击化学反应，最终得到所述的温敏性水凝胶。本发明提供的该水凝胶的结构独特，力学强度较好，可生物降解，在生物医药领域有潜在的应用价值。