本发明属于结肠癌定位释放治疗药物和高分子材料的技术领域，具体涉及一种具有pH敏感性和时滞性的5-氟尿嘧啶分子表面印迹微球制备方法。按照如下的步骤制备：步骤一，将对苯乙烯磺酸钠溶解于纯净水中，加入5-氟尿嘧啶，搅拌获得预聚合物；功能单体对苯乙烯磺酸钠（SSS）与模板分子5-FU是通过静电相互作用形成非共价键。步骤二，将乙烯醇微球加入上述预聚合物中，再加入交联剂N,N'-亚甲基双丙烯酰胺，通氮气以排除空气后，加入引发剂和催化剂，氮气保护条件下反应，获得5-氟尿嘧啶分子表面印迹微球。本发明制备的印迹微球载药MIP-PSSS/CPVA微球具有pH敏感性，随着pH值增大，释放量增大。