本发明涉及一种焉耆黑蘑菇菌种分离及其人工栽培方法，该方法包括菌种分离、母种的液体扩繁、栽培培养基配方与制作、驯化栽培步骤完成。采用本发明所述方法可人工栽培获得焉耆黑蘑菇优质产品，为食用菌市场提供优异新品种-焉耆黑蘑菇。本发明所述方法获得的焉耆黑蘑菇栽培周期为4-5个月，生物学效率可达50%以上，子实体的菌盖菌柄均为白色，具有黄褐色鳞片，开伞后菌褶为红褐色，蛋白含量高，味道鲜美，保持着野生菇特有的品质，具有较强的抗氧化抗衰老功能，深受人们喜爱。