本发明属于病毒学和基因工程技术领域，具体涉及一种表达狂犬病病毒主要免疫原性糖蛋白(RVG)的重组假型杆状病毒的构建、疫苗制备及应用。本发明得到的重组假型杆状病毒含有双表达盒，既含PPH启动子驱动RVG表达并使其展示在病毒粒子囊膜表面的昆虫细胞表达盒，又含CMV启动子驱动RVG在哺乳动物细胞中高效表达的哺乳动物细胞表达盒。用该重组杆状病毒制备的狂犬病疫苗具有亚单位疫苗和活病毒载体疫苗的双重特性。免疫小鼠后，能刺激机体产生高水平的狂犬病病毒特异性ELISA抗体、中和抗体以及IFN-γ，具有潜在的疫苗应用价值。该重组杆状病毒BV-RVG/RVG保藏在中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，其保藏编号为CCTCC NO：V201022。本发明还包含了该重组杆状病毒疫苗的制备及应用。