本发明涉及一种检测农药残留的酶生物传感器制备方法，其特征在于：多壁碳-壳聚糖复合物、纳米金胶的制备，层层自组装固定多层聚二烯丙基二甲基氯化铵和乙酰胆碱酯酶，乙酰胆碱酯酶传感器的制备及性能测试。多壁碳-壳聚糖复合物和纳米金胶作为载体材料修饰玻碳电极时，可以改善电极表面的微环境，促进电化学反应中电子的传递，提高电极上的电流响应。聚二烯丙基二甲基氯化铵和乙酰胆碱酯酶通过静电吸附作用层层自组装修饰玻碳电极，提高了乙酰胆碱酯酶的固定量，进而提高了生物传感器的稳定性。同过本方法制备的电流型乙酰胆碱酯酶传感器检测时间短，稳定性好，灵敏度高，再生能力强，并可用于实际样品的检测。