本发明公开了一种以黏土为载体的固定化脂肪酶的制备方法，首先将黏土与水和絮凝剂混匀，将得到的料浆注入模具内成型，干燥后将黏土在一定温度下煅烧，然后粉碎、分筛，再对分筛好的黏土分别进行羟基化和硅烷化处理，将处理好的黏土载体加入用缓冲液配好的脂肪酶溶液中，经摇床振荡吸附，吸附完成后，用缓冲液清洗黏土，直到没有蛋白洗脱下来，冷冻干燥得到固定化脂肪酶；本方法采用的黏土具有原料易得，价格低廉的特点，同时也具有很好的物理吸附性和表面化学活性，经过改性处理后，能显著提升载体的吸附性能，制得的固定化酶不仅反应酶活高，而且比游离脂肪酶有着更好的催化活性。