本发明公开了一种诱导烟草叶片丛生芽快速生根的方法，选取生长均匀一致、苗高2.0~3.0cm烟草叶片的丛生芽剪下，去除底部叶片，保留顶部叶片和顶芽；用培养瓶盛装培养基，以顶部叶片接触诱导生根培养基的方式放置烟草叶片丛生芽，顶芽离培养基表面为0.5~1.0cm，在常规光照条件下恒温培养12~14d，培养温度为26~28℃，培养瓶内相对湿度为90%以上。本发明利用已驯化烟草叶片其吸收营养物质、生长物质极性运输的特性，取其丛生芽作为诱导生根材料，采用倒置培养方式，实现烟草叶片丛生芽的快速生根。与常规正向放置方式相比，提高了丛生芽生根的效率，缩短9~12天，节省了培养时间和培养空间，诱导所生根系不接触培养基省去了煅苗时洗根操作，节省了劳力，具有广泛的应用前景。