本发明提供一种绿花重瓣铁线莲组织培养快繁方法，步骤包括：取绿花重瓣铁线莲幼茎的茎尖，在超净台上用无菌水冲洗、75％酒精浸泡处理20～30秒，再用0.1～0.2％升汞浸泡消毒6～10分钟，无菌水冲洗干净后接种到丛芽诱导培养基中进行初代诱导培养；2)将初代诱导培养得到的丛生芽分成单个小芽，接种到丛芽增殖培养基中进行继代培养；3)当芽苗长至2～3cm时接种到壮苗生根培养基中进行生根培养。本发明方法可以快速繁殖绿花重瓣铁线莲，不仅可以节约培育种苗成本、提高生产效率，而且不受外界条件的限制，四季皆可进行，节约育苗占地面积，可在短期内形成大量优良试管苗，进行规模化、工厂化生产。