本发明提供一种烟草种子人工辅助授粉繁殖方法。所述烟草种子人工辅助授粉繁殖方法具体包括育苗，按照每三行为一个烟株带的规格进行开沟条施基肥，覆盖地膜，每三行为一个烟株带的规格移栽，揭膜施追肥，中耕培土，去杂去劣，打顶中间行烟株高度控制在100-120cm，两侧行的烟株高度控制在90-110cm，抹芽留杈，施坐果肥，促花保花，采用人工辅助授粉，保果，疏花，蒴果成熟采收。本发明操作简单、投入生产成本低、种子产量高，比常规繁殖方法的5～8kg/亩，提高到18～27kg/亩，增加幅度的3-4倍。