本发明公开了一种大熊猫源轮状病毒CH-1株的Real-time PCR非诊断性检测方法，上游引物F：5′-AGTTATACGCAGCACGGACC-3′，下游引物R：5′-GTTGTTGCGTTTGGTGTGGT-3；引物浓度是0.5μmol/L，Real-time PCR循环条件为：95℃预变性30s，94℃变性5s，60.5℃退火30s，进行40个循环，每个循环后检测荧光信号。本发明建立的荧光定量RT-PCR方法检测到的最小拷贝数为1.0×100拷贝/μL，比常规RT-PCR的灵敏度至少高出100倍。