一种光学玻璃亚表面缺陷的检测方法，包括下列的步骤：①将辅助溶剂和水按20%-50%比例均匀混合，形成混合液体；②向所述的混合液体中加入荧光素得到缓冲液,荧光素在混合液体中的浓度为1×10-5molL～5×10-3molL；③在磨料中加入所述的缓冲液作为研磨剂，使用该研磨剂研磨光学玻璃；④在抛光粉中加入所述的缓冲液作为抛光液，使用该抛光液抛光光学玻璃；⑤使用超声波酒精清洗所述的抛光光学玻璃,在355nm单色光照射下，使用荧光显微镜观测抛光后的光学玻璃。本发明对光学玻璃亚表面缺陷的无损检测，具有显示、定位、无损、可标记的特点。