本发明公开了一种单核细胞增生李斯特氏菌LAMP检测试剂盒及检测方法，属于食品安全的分子生物学检测方法领域。本发明的LAMP检测试剂盒中检测引物组包括检测引物组及内标引物组；检测试剂盒包括引物组、反应液、DNA聚合酶、核酸荧光染料、阳性对照和内标。其检测方法是通过提取待检样品，在63～65℃对样品模板进行30-45分钟的扩增，不仅可检测待检样品是否含有单核细胞增生李斯特氏菌，同时可根据检测内标引物组是否有扩增来判断是否有假阴性检测结果。本发明具有快速高效、操作简便、高特异性、高灵敏度、适合现场检测等优点，并且可有效防止假阴性的发生，适于推广应用。