本发明涉及一种草菇V14菌株分子特异性检测标记及其检测方法，特异性检测标记为：V14F：GAGCAACCGAACCTCAACAACAC；V14R：CGCCGTGTCCGTTCATACCAAGC。检测方法：将草菇V14菌株接种PDA平板培养基，32℃培养3-5d，刮取表面菌丝装入无菌离心管中，然后用改进的CTAB法提取基因组DNA，得到DNA；以上述提取的DNA为模板，特异性检测标记引物为扩增引物，进行PCR扩增，得PCR扩增产物，进行电泳检测。本发明方法与常规形态学检测、拮抗试验和出菇实验等方法相比，具有检测时间短，准确性高的优点。