本发明提供一种抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体及其应用，涉及生物技术领域。一种分泌抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株D3，其保藏号为CCTCCC201383。所述杂交瘤细胞株D3分泌的抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体。所述抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体在制备检测弓形虫的试剂盒、胶体金试纸条中的应用。本发明杂交瘤细胞株D3能够稳定、高效的分泌抗弓形虫MIC3蛋白单克隆抗体。该单克隆抗体对弓形虫MIC3蛋白的效价高，特异性好，因此，可以用于制备检测弓形虫的试剂盒和胶体金试纸条。所述单克隆抗体的制备方法简单，抗体纯化过程简单，效率高，成本低。