本发明属组织工程和医用材料领域，涉及呼吸道上皮-多孔丝素蛋白复合物及其制备方法和应用，尤其是在多孔丝素蛋白上进行呼吸道上皮培养的方法，及呼吸道上皮-多孔丝素蛋白复合物在气管缺损重建中的应用。本发明采用多孔蛋白丝素作为支架材料，原代人呼吸道上皮细胞作为种子细胞，将呼吸道上皮细胞在多孔丝素蛋白上进行复合培养形成呼吸道上皮-多孔丝素蛋白复合物。该复合物覆盖于人工气管内壁，使人工气管内壁被覆呼吸道粘膜，更接近于正常气管结构，可进一步作为医用材料制备组织工程化气管，以及用于临床气管粘膜修复及临床重建气管缺损，以及减少重建气管术后并发症。