本发明公开了一种唾液酸、羟脯氨酸联合检测试剂盒，由显色剂和参比品液组成，其中，显色剂是由邻苯二甲酸二乙酯、乙酸乙酯、2,4-二硝基苯肼、过氧化氢、盐酸和水组成的，其中，各组分的浓度如下：邻苯二甲酸二乙酯0.35mol/L；乙酸乙酯0.46mol/L；2,4-二硝基苯肼0.07mol/L；过氧化氢0.006mol/L；盐酸（氯化氢）0.62mol/L；参比品液是由唾液酸、L-羟脯氨酸和水组成的，各组分的浓度如下：唾液酸0.3g/L；L-羟脯氨酸0.25g/L。本发明采用特定的显色分析技术，在同一检测体系中，通过一次反应使多种肿瘤标志物（唾液酸、羟脯氨酸）反应显色，由于显色迭加，因而提高了检测的灵敏度，顺应了肿瘤标志物联合检测的潮流，并且操作简便，无须贵重仪器，便于推广应用。