本发明公开了一种测定猪肺炎支原体生长滴度的绝对荧光定量PCR引物对、探针及方法。所述绝对荧光定量PCR引物对的序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示，所述绝对荧光定量PCR探针的序列如SEQ ID NO.3所示。所述测定猪肺炎支原体生长滴度的绝对荧光定量PCR方法，包括以下步骤：（1）猪肺炎支原体DNA的提取；（2）普通PCR扩增出目的片段，在目的片段的中间设计绝对荧光定量PCR引物对和探针；（3）目的片段连接PMD-18-T载体制备质粒，转染感受态细胞，提取阳性菌液的质粒；（4）将步骤（3）提取的质粒作为标准品，测算出起始质粒拷贝数；（5）进行荧光定量PCR反应。本发明测定猪肺炎支原体生长滴度的绝对荧光定量PCR方法可以快速精确的测定目的基因的拷贝数，即猪肺炎支原体的生长滴度。