本发明公开了二硫代磷酸酯类农药代谢物的高效液相色谱-串联质谱检测方法，属于二硫代磷酸酯类农药代谢物的检测领域。所述方法包括：将含有二硫代磷酸酯类农药代谢物的样品进行前处理；用3-溴甲基-4-硝基苯甲酸对样品进行衍生化处理；衍生化产物用液相色谱-串联质谱进行检测。本发明检测方法对于土壤中二硫代磷酸酯类农药代谢物的回收率为79.3～90.7%，精密度为9.38%和5.93%，检出限为0.01mg/kg和0.005mg/kg，在0.005～1.000mg/kg范围内线性相关系数为0.9992和0.9997，具有良好的回收率、定量限、精密度和线性，符合农产品中农药残留及其代谢物检测方法的要求。