本发明涉及一种色谱饼填料及其应用。所涉及的一种色谱饼填料为粒径小于等于2μm的甲基丙烯酸环氧丙酯微球。该填料的制备方法包括制备粒径小于1μm的聚苯乙烯种子液和制备粒径小于等于2μm的甲基丙烯酸环氧丙酯微球。所涉及的另外一种色谱饼填料为改性后的粒径小于等于2μm的甲基丙烯酸环氧丙酯微球。本发明的色谱饼填料颗粒均匀；改性后的色谱饼填料键合密度大、负载量高；所涉及的应用是将所涉及的改性填料用于分子量大于5000的多肽和蛋白质类生物大分子。