本发明公开了一种用调控植物结瘤固氮能力的RNA干扰载体，包括骨架载体和发夹结构，所述发夹结构利用SEQ ID NO：2所示的基因片段构建，将基因片段插入到pTCK303载体的限制性内切酶Kpn I/Spe I和BamH I/Sac I酶切识别位点之间，得到重组RNA干扰载体。使所得RNA干扰载体转化受体植物，沉默受体植物中的对应基因，使受体植物的根组织具有增强的结瘤固氮能力。利用本发明构建的RNA干扰载体转化受体大豆植株获得转基因植物，能够显著提高大豆的结瘤固氮能力，对提高大豆产量具有重大的意义。