本发明公开了一种化学成分确定的培养基，以公开的DMEM/F12配方为基础，调整各组成成分浓度，并在此基础上增减某些成分，适用于多种哺乳动物细胞的大规模生产。本发明还公开了上述培养基在大规模培养哺乳动物细胞（CHO细胞、BHK细胞或杂交瘤细胞）中的应用以及大规模培养哺乳动物细胞的生产工艺。本发明的培养基不含血清和蛋白质，并去除了以往培养基中所使用的动物成分及植物蛋白水解物，所有组分化学成分确定，有利于产物的纯化、生产批次的稳定性，从而保证和提高了产品质量；采用本发明的培养基和生产工艺，可提高细胞密度并提高目的产物产量，整体生产成本低。