本发明涉及一种中生菌素含量的分析方法，采用液相色谱紫外检测法测定，采用纯水作溶剂，使用反相C18色谱柱，以离子对水溶液与纯乙腈的混合体系为流动相，所述离子对水溶液主要由占质量分数为0.01%-0.05%庚烷磺酸钠与PH=1.7-3.0的酸性缓冲溶液组成。该中生菌素含量分析方法中，采用离子对水溶液与纯乙腈为流动相以及反相C18色谱柱，能够得到出色的峰形，且色谱柱再生时更加的方便，延长了色谱柱的使用寿命，使用的流动相大部分是水，从而降低了检测成本，适合于中生菌素含量的实时监测，所得的结果更加准确。